第八百一十八章 复方川贝消喉喷雾（完）(1/2)

“这个实验其实不不难，一共只分为两步。”

“首先是聚合酶链式反应，即pcr扩增反应；第二步是酶切反应。”

张兴运介绍道。

第一步，在pcr扩增反应部分，只需要跟着想要的结果，明确各种试剂和样品的加入量以及扩增条件，按照正常的要求操作即可。

需要注意的是，吸取试剂时，一定要排尽气泡，由于试剂的加入量都非常小，滴加试剂时，常常出现试剂聚集在枪头尖端，形成一个小液滴，难以滴下，可以将液滴打到离心管内壁上。

利用其与离心管内壁的吸附作用力，将液滴留在离心管内。

最后，再用无菌超纯水补足3滴反应体系后，将离心管盖盖好，至于离一t2机中，离心30秒，以使试剂、样品和水在离心管底部充分混匀。

更有利于pcr反应的顺利进行，可以大大增加扩增反应的成功率。

至于酶切反应。

可以在滴加实验一得到的结果后，再滴加适量bsa，它是一种酶切反应催化剂，能够使酶切反应进行更彻底。

酶切效果更好：通常试剂一与bsa的体积比约为1：2。

“我们在在川贝母的pcr鉴别试验中，ai加入量为0。5斗l，bsa的加入量为1斗。滴加bsa后，酶切反应的体系仍为20斗，所以无菌超纯水的加入量要相应减少。酶切反应的条件应设置为30，反应2h。”张兴运说道。

陈浩然还是沉默。

但这种沉默已经代表了一种态度。

不赞同，不拒绝。就静静的看着，即便你作死也好，即便你成仙也罢，他都这么静静的看着。

当然，实验室里面的实验还在继续。

“电泳检测酶切反应完成后所得到的溶液。得到的结果是？”杨光问道。

“含有标准规定的长度在100～250bp的两条dna条带，需要用琼脂糖凝胶电泳法进行检视。”终于回答道。

走到这一步，实验的还在继续。

但至少杨光并没有再提出什么质疑。

钟医和杨光还是按照实验步骤再进行，首先，需要制胶和配制电泳缓冲液，制胶用缓冲液和电泳缓冲液应保持一致，用百分之1的tae或tbe即可。

“注意，在制胶过程中注意做好防护，切勿烫伤。”钟医提醒道。

“假好心。我会出事？”杨光没气的说道。

两人，待胶溶液温度下降至60c左右时，滴加少量gelred，振摇混匀后缓慢倾倒人插好梳子的胶槽中，他们尽量不产生气泡，以免影响电泳效果。

待胶凝固并冷却至室温后。即可将其转移至电泳槽中，准备电泳。

下一步，两人依次将样品、对照药材、空白对照加入胶孑l中。

杨光特别小心，手十分稳，没有戳破胶孑l边缘或戳穿胶孔底部。以免影电泳效果。

“他们现在再加加样缓冲液，这样做主要是两个作用。”

“一方面其密度较大，可使样品沉积在胶孔底部，避免样品上浮外溢，保障电泳条带密集紧凑，防止扩散。”

“另一方面，其中添加染色剂。可以在电泳过程中指示前沿。电泳结束后。可将凝胶置于凝胶成像仪上进行检视。”

张兴运说道。

而杨光这么一路实验坐下来，正如张兴运在报告之中所写的那样。

在与对照药材凝胶电泳图谱相应的位置上，在100～250bp应有两条dna条带，空白对照无条带。

只有一点有点问题。

“为什么其中有一条条带中出现弥散的情况？”杨光疑惑的问道。

“出现弥散的原因只可能两种。”钟医想了想回答道：“一方面可能是制胶所用缓冲液与电泳缓冲液不一致，应保持一致。另一种，可能是电泳缓冲液长期未更换，缓冲盐浓度变化，或缓冲液被污染，应及时更换缓冲液。”

钟医的回答打消了杨光的疑惑。

实验做到这儿，杨光也明白了，钟医没有撒谎，张兴运的报告百分之百真实。

整个实验的难点就在于酶切反应。

但是两人都是实验室的好手，自然不会因为这一点小问题出问题。

“现在华夏有什么重要是用了分子生物学技术在中药鉴定方面吗？我说的是已经有标准的。”杨光问道。

“目前仅有蕲蛇、乌梢蛇的分子生物学鉴别收入我国医药中标准，分别采用了pcr和聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性鉴别方法。还有就是我们刚刚做的川贝了。”钟医回答道。

是的，分子生物学技术在中药鉴定方面的应用方兴未艾。

这是一场危机，也是一个机遇。

就如同dna条形码方法在中药材鉴定方面取得较好的效果一样。

中药鉴定道阻且长，需要经验鉴别、分子生物学技术、理化鉴别和显微技术的共同合作。才能真正实现中药材和饮片的明确鉴定，才能保障中药和中医产业的长足发展。

“我无话可说，我这边让你们过了。”杨光摆了摆手说道。

是的，从科学上，从实验上，从药理上，杨光都无话可说。

在钟医的指导下，杨光的这个研究严密到不可思议的一个地步，让人想要从中早一点什么错误出来都特别的难。

听到杨光这么说，外面已经传来了压抑不住的欢呼声。

“张兴运医生这也太强了吧。他不是中医嘛，竟然也能让杨光哑口无言。”

“废话，只要道理还是那个道理，那么掌握真理的人一定不怕什么的